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當(dāng)前位置:首頁(yè)產(chǎn)品中心PCR試劑盒50T古典豬瘟、非洲豬瘟病毒PCR試劑盒

古典豬瘟、非洲豬瘟病毒PCR試劑盒
產(chǎn)品簡(jiǎn)介

古典豬瘟、非洲豬瘟病毒PCR試劑盒是上海臻科生物科技有限公司的產(chǎn)品,靈敏度好,準(zhǔn)確性高,現(xiàn)貨供應(yīng),歡迎廣大新老客戶(hù)前來(lái)選購(gòu)。

產(chǎn)品型號(hào):50T
更新時(shí)間:2025-07-01
廠(chǎng)商性質(zhì):生產(chǎn)廠(chǎng)家
訪(fǎng)問(wèn)量:432
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【產(chǎn)品名稱(chēng)】古典豬瘟、非洲豬瘟病毒PCR試劑盒

【包裝規(guī)格】 50T/盒

【產(chǎn)品方法】雙色實(shí)時(shí)熒光PCR法

【預(yù)期用途】

本試劑盒利用實(shí)時(shí)熒光PCR原理,定性檢測(cè)古典豬瘟、非洲豬瘟病毒,對(duì)古典豬瘟、非洲豬瘟病毒引起的***的診斷和監(jiān)控具有重要指導(dǎo)意義。

古典豬瘟、非洲豬瘟病毒PCR試劑盒【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒針對(duì)古典豬瘟、非洲豬瘟病毒高度保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和探針,在反應(yīng)體系中含古典豬瘟、非洲豬瘟病毒基因組模板的情況下,PCR反應(yīng)得以進(jìn)行并釋放熒光信號(hào)。利用儀器對(duì)PCR過(guò)程中相應(yīng)通道的信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)和輸出,實(shí)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果的定性分析。

【主要組成成份】

  RT-PCR反應(yīng)液

50T/盒

逆轉(zhuǎn)錄酶

750 μL×1管

 Taq酶

100 μL×1管

陽(yáng)性對(duì)照

150 μL×1管

陰性對(duì)照

 40 μL×1管

說(shuō)明書(shū)

1份


【儲(chǔ)存條件及有效期】

避光-20℃以下保存,避免反復(fù)凍融,有效期為12個(gè)月。

【適用儀器】
ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。

【檢驗(yàn)方法】

1.試劑準(zhǔn)備(試劑準(zhǔn)備區(qū))

(1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實(shí)驗(yàn)所需試劑,充分融化混勻并瞬時(shí)離心以去除管壁附著液體。

(2)核算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的反應(yīng)數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計(jì)算當(dāng)次實(shí)驗(yàn)所需要的各種試劑量。

n =陰性對(duì)照數(shù)(1T)+陽(yáng)性對(duì)照數(shù)(1T)+誤差預(yù)留量(1T)+樣本數(shù)

單反液配制表(每份)

RT-PCR反應(yīng)液

15.0 μL

逆轉(zhuǎn)錄酶

 2.0 μL

Taq酶

 3.0 μL

(3)在無(wú)菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時(shí)離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。

(4)蓋緊PCR反應(yīng)管蓋后將PCR反應(yīng)管轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存。

2.樣本準(zhǔn)備(樣本處理區(qū))

用QIAGEN、Roche公司DNA提qu試劑盒提quDNA,具體操作按照其試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

3.加樣

   在上述制備好的PCR反應(yīng)管中分別加入處理好的待測(cè)標(biāo)本RNA各5 μl、終體積25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。

    根據(jù)需要,在上述準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管中分別加入陰性對(duì)照品以及陽(yáng)性對(duì)照品各5 μl,終體積為25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時(shí)低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。

4.PCR(PCR擴(kuò)增區(qū))

(1)取樣本處理區(qū)準(zhǔn)備好的PCR反應(yīng)管,放置在實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,并記錄放置順序。

(2)按下表設(shè)置儀器核酸擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

注:ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時(shí)不選ROX校正,設(shè)置淬滅基團(tuán)選擇None。

反應(yīng)體積

25 μL

通道選擇

FAM通道采集 AIV-H5熒光信號(hào)

HEX通道采集 AIV-N6熒光信號(hào)

 PCR

反應(yīng)

條件

步驟

條件

循環(huán)數(shù)

反轉(zhuǎn)錄

42℃:10分鐘(min)

1

預(yù)變性

95℃:3分鐘(min)

1

預(yù)擴(kuò)增

95℃:5秒(s)

5

55℃:40秒(s)

PCR擴(kuò)增

95℃:5秒(s)

40

55℃:40秒(s)

(此階段結(jié)束時(shí)采集熒光信號(hào))


【參考值(參考范圍)】

1.試劑盒有效性判定:

(1)陽(yáng)性對(duì)照:有典型S型擴(kuò)增曲線(xiàn)或Ct值≤35。

(2)陰性對(duì)照:Ct值>38或無(wú)Ct值,線(xiàn)形為直線(xiàn)或輕微斜線(xiàn),無(wú)指數(shù)增長(zhǎng)期。

2.標(biāo)本結(jié)果判定:

(1)陽(yáng)性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期。

(2)可疑:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時(shí)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行重復(fù)檢測(cè),如重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長(zhǎng)期,則判定為陽(yáng)性,否則為陰性。

(3)陰性:標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果Ct值>38或無(wú)Ct值。

【檢驗(yàn)方法的局限性】

當(dāng)檢測(cè)樣本中被檢核酸濃度含量低于本試劑盒的最di檢出限shi可能會(huì)發(fā)生假陰性的結(jié)果。

本試劑盒僅供標(biāo)本初步篩查使用,對(duì)于本試劑盒檢測(cè)陽(yáng)性結(jié)果應(yīng)進(jìn)一步使用培養(yǎng)法進(jìn)行確診。

【注意事項(xiàng)】

使用本試劑盒的實(shí)驗(yàn)室,應(yīng)嚴(yán)格按照國(guó)家有關(guān)部分頒布的有關(guān)基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范進(jìn)行管理;

為避免RNA降解,樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè);樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理;

各區(qū)域物品均為專(zhuān)用,不得交叉使用,以免污染;檢測(cè)結(jié)束后,應(yīng)立即對(duì)工作臺(tái)清潔;

吸取反應(yīng)液時(shí),應(yīng)盡量避免產(chǎn)生氣泡;上PCR 儀前,應(yīng)注意檢查各反應(yīng)管是否蓋緊,以免液體蒸發(fā)造成結(jié)果不準(zhǔn)確;

試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時(shí)離心;

試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在第一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū),并單獨(dú)存放;

為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記;

檢測(cè)過(guò)程中使用過(guò)的吸頭,應(yīng)直接打到盛有10%次氯酸的廢物缸內(nèi),檢測(cè)結(jié)束的PCR 反應(yīng)管,切忌開(kāi)蓋,并與其他廢棄物品一同滅菌后丟棄;工作臺(tái)及各種實(shí)驗(yàn)用品應(yīng)定期用10%次氯酸、75%酒精或紫外燈進(jìn)行消毒;

9.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置;不同批號(hào)試劑不能混用;并在有效期內(nèi)使用。

【相關(guān)產(chǎn)品】

ZK-D-0617立克次氏體檢測(cè)試劑盒(實(shí)時(shí)熒光PCR法)
ZK-D-0618病毒DNA/RNA核酸提取試劑盒
ZK-D-0619通用型DNA核酸提取試劑盒
ZK-D-0620犬冠狀病毒(CFCOV)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)
ZK-D-0621乙型流感病毒Victoria系Yamagata系(BvBy)核酸檢測(cè)試劑盒(雙重?zé)晒?PCR法)
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