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當前位置:首頁產品中心PCR試劑盒50T單增李斯特菌(LM)PCR試劑盒

單增李斯特菌(LM)PCR試劑盒
產品簡介

單增李斯特菌(LM)PCR試劑盒是上海臻科生物科技有限公司的產品,靈敏度好,準確性高,現貨供應,歡迎廣大新老客戶前來選購。

產品型號:50T
更新時間:2025-06-30
廠商性質:生產廠家
訪問量:300
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【產品名稱】單增李斯特菌(LM)PCR試劑盒

【包裝規格】 50T/盒

產品方法實時熒光PCR法

【預期用途】

適用于檢測,可用于臨床單增李斯特菌(LM)感染的輔助診斷,但不作確診使用。

單增李斯特菌(LM)PCR試劑盒【檢驗原理】

本試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術,設計一對單增李斯特菌(LM)特異性引物,結合一條特異性探針, 利用相應儀器對 PCR 過程進行實時監測,實現檢測結果的定性分析,用于臨床上對可疑感染者的病原 學診斷。

【主要組成成份】

反應液、酶液、陽性質控品、陰性質控品。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融次數不超過 5 次,有效期 12 個月。

【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、Eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【保存和運輸】 上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸, 嚴禁反復凍融。

【使用方法】 

1 樣品處理(樣本處理區)

1.1樣本前處理 

血液、體液和棉拭子樣本取 100μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

1.2 核酸提取

推薦采用核酸提qu或純化試劑(磁珠法或離心柱法)進行核酸提qu, 請按照試劑說明書進行操作。

2. 試劑配制(試劑準備區) 

根據待檢測樣本總數,設所需要的 PCR 反應管管數為 N(N=樣本數+1 管陰性對照+1 管陽性對照;反應管 數每滿 10 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

試劑

RP反應液

酶液

用量(樣本數為 N)

20μL

1μL


將混合好的測試反應液分裝到 PCR 反應管中,21μL/管。

3.加樣(樣本處理區) 

將步驟 1 提取的核酸、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短 暫離心。

4.PCR 擴增(核酸擴增區)

4.1將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;

4.2設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25μL; 熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,選擇 None 即可。

4.3推薦循環參數設置:

步驟

循環數

溫度

時間

收集熒光信號

1

1cycle

95℃

10min

2

40cycles

94

15sec

55

30sec

2.結果分析判定

2.1 結果分析條件設定 設置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出現整體傾斜時,根據分析后圖像 調節 Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節)、stop 值(一般可在 5~20 范圍內調節),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

2.2 結果判斷 陽性:檢測通道 Ct 值≤35,且曲線有明顯的指數增長曲線; 可疑:檢測通道 35值≤38,建議重復檢測,如果檢測通道仍為 35值≤38,且曲線有明顯的增長曲線, 判定為陽性,否則為陰性; 陰性:樣本檢測結果 Ct 值>38 或無 Ct 值。

3.質控標準

 陰性質控品:Ct>38 或無 Ct 值顯示; 陽性質控品:擴增曲線有明顯指數生長期,且 Ct 值≤32; 以上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。

4.檢測方法的局限性 

1.樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;

2.樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現假陽性結果;

3.陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;

4.病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;

5.不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;

6.試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現假陰性或定量檢測不準確的結果;
7.本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

【注意事項】

1.所有操作嚴格按照說明書進行;

2.試劑盒內各種組分使用前應自然融化,完quan混勻并短暫離心;

3.反應液應避光保存;

4.反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5.使用一次性吸頭、一次性手套和各區專用工作服;

6.樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區進行,以免交叉污染;

7.實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

8.試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫學實驗室生物安全通則》進行處理。
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